獣医学と医療診断ジャーナル

ダイオードアレイ検出を用いた高速液体クロマトグラフィーによる周産期乳牛血清中のトリプトファン、キヌレニン、ナイアシンの同時測定

リアン・ヒュター、ジュリア・ハートヴィガー、キャロライン・ドロング、ウルリッヒ・マイヤー、スヴェン・デニッケ

ダイオードアレイ検出を用いた高速液体クロマトグラフィーによる周産期乳牛血清中のトリプトファン、キヌレニン、ナイアシンの同時測定

トリプトファンは必須アミノ酸であり、神経伝達物質セロトニンの生成や、グルココルチコイドホルモンを介した酵素トリプトファン 2,3-ジオキシゲナーゼ (TDO) または免疫活性化後のインドールアミン 2,3-ジオキシゲナーゼ (IDO) によって誘導されるキヌレニン経路を介したキヌレニンおよびニコチンアミドの生成など、重要な生化学的経路の基質です。キヌレニンとトリプトファンの比率は活性化された免疫システムの指標と見なされているため、高速液体クロマトグラフィー (HPLC) によって血清中のキヌレニン、トリプトファン、およびニコチンアミドを同時に測定する分析法を開発し、乳牛の炎症マーカーとしての適合性を評価しました。バリデーションパラメータは、HPLC法が血清中のトリプトファンとその代謝産物であるキヌレニンとニコチンアミドの日常分析の要件を、ニコチンアミドの場合は0.41 µmol L-1、キヌレニンの場合は0.43 µmol L-1、トリプトファンの場合は3.40 µmol L-1のそれぞれの作業範囲内で高い直線性で満たしていることを示しました。日内変動と日間変動は、それぞれ2.3%と3.6% (ニコチンアミド)、3.1%と6.3% (キヌレニン)、1.9%と5.2% (トリプトファン)でした。キヌレニン経路によるトリプトファン分解は、移行期間中に2つの食餌群のうち10頭の周産期乳牛で調査されました。分娩前後の牛血清中のトリプトファン濃度の推移は、出産まで減少し、出産後にトリプトファン濃度が増加して正常化するという点で、妊娠女性のそれと類似していた。しかし、妊娠中のキヌレニン濃度の上昇とキヌレニン対トリプトファン比の同時上昇は、ストレスホルモンによる肝臓TDOおよび肝臓外IDOの活性化が原因である可能性がある出産時のキヌレニン対トリプトファン比のピークを除いて、本研究では確認できなかった。TDOおよびIDOの推定誘導因子としてのインターフェロン-γおよびグルココルチコイドの追加測定は、キヌレニン対トリプトファン比がウシの免疫マーカーとして適切であることを確認するために有用であろう。