獣医学と医療診断ジャーナル

ブロイラーにおけるリアルタイム RT-PCR と S1 遺伝子配列による感染性気管支炎ウイルス株の調査

エンジン・アルプ・オネンとヤクート・オズグル

本研究では、迅速かつ高感度のウイルス検出法として報告されているリアルタイム RT-PCR による鶏気管スワブサンプルからの感染性気管支炎ウイルス (IBV) の検出を目的とした。IBV の S1 遺伝子の超可変領域 (HVR) の配列決定により、IBV の異なる分野および変異株における系統関係を決定した。呼吸器症状のあるブロイラー鶏 120 羽から気管スワブを無作為に採取した。サンプルは SPF 発育鶏卵の尿膜液 (AF) に接種した。AF により RNA を抽出した。RNA は ss cDNA に変換された。リアルタイム RT-PCR は、二重標識 Taqman プローブ、IBV 5 GU391 および IBV5 GL533 プライマーペアを用いて実施した。リアルタイム RT-PCR により、120 サンプル中 33 サンプル (27.5 %) で陽性結果が得られた。陽性サンプルのcDNAは、C2UプライマーとAg0723プライマーを使用してS1遺伝子領域のHVR（超可変領域）の増幅に使用されました。サンプルは、S1 5'modプライマーとCK2プライマーによっても増幅されました。RT-PCR産物は直接配列決定されました。配列決定結果は、NCBIのヌクレオチドデータベースと比較されました。配列決定結果は、遺伝子バンクデータベースのいくつかの変異IBV株と72〜86％の割合で一致しました。これらの結果は、変異IBV株に直面していることを裏付けています。また、アラインメントには多くのSNP変異が観察されました。この研究は、鳥がクラシックタイプのワクチンで予防接種を受けたにもかかわらず、27.5％の割合でIBV変異株に感染する可能性があることを示しています。これらの結果は、IBVの古典的なワクチン株による予防接種では、変異株に対する十分な交差防御を提供できないことを示しています。したがって、ワクチン接種を受けた群れで依然として病気の発生が発生します。また、これらのプライマーは、すべてのIBV野生株を配列決定して分類するのに十分ではないことがわかりました。したがって、異なるプライマーを開発し、2つ以上のプライマーペアを使用する必要があります。この実験では、SPF卵AFでのIBV複製のため、ウイルス負荷はスワブサンプルよりもAFで多くなることが分かりました。14日齢のニワトリ胚で矮小化と出血が観察されました。