獣医学と医療診断ジャーナル

ウイルス感染の診断における組換えヒスチジンタグ抗原の応用

モハメッド・M・ホセインとレイモンド・R・ローランド

ヒスチジンタグ付きタンパク質は、抗体で頻繁に検出されます。ヒスチジンタグ付きタンパク質は、ヒスチジンタグに特異的な抗体で頻繁に検出されます。これらは免疫学的研究に有用です。蛍光マイクロスフィア免疫アッセイ (FMIA) の各マイクロスフィアビーズセットに付着した組み換えタンパク質の相対量を推定するために、ペンタ His モノクローナル抗体 (mAb) が使用されました。この研究では、カップリング後にマイクロスフィアビーズに​​結合した 7 つの異なる動物ウイルス (豚繁殖・呼吸器症候群ウイルス (PRRSV)、豚サーコウイルス 2 型 (PCV2)、豚インフルエンザウイルス (SIV)、アフリカ豚コレラウイルス (ASFV)、豚コレラウイルス (CSFV)、牛ウイルス性下痢ウイルス (BVDV)、リフトバレー熱ウイルス (RVFV)) の組み換え抗原の検出における抗 His mAb の使用をテストしました。タンパク質は、6xHis-ユビキチン融合タンパク質として生成され、Luminex MagPlex® ポリスチレンカルボキシル化マイクロスフェアビーズに​​共有結合しました。標的抗原は単一のマルチプレックスに組み立てられ、抗 His-tag mAb の存在下でテストされました。結果は平均蛍光強度 (MFI) として報告されました。His タグ組み換え抗原と抗 His-tag mAb 間の相互作用は、His タグブロッキングペプチドを使用してテストされました。His タグブロッキングアッセイの結果、1 μg/ml の His-tag ブロッキングペプチドは、His タグ抗原と抗 HismAb の相互作用を完全に阻害できることが示されました。陰性血清サンプルの MFI 値は、PRRSV-N、PCV2、SIV、ASFV、CSFV、および BVDV 陽性血清と比較して 10 ～ 40 倍減少しました。したがって、抗 His mAb の使用は、ビーズへの抗原結合を評価するための便利な手段となります。